在生物制药领域，细胞、蛋白质、核酸等活体生物材料的复杂性决定了其对生产环境的极端敏感性。洁净室车间作为生产的核心战场，其对尘粒和微生物污染的绝对控制，直接决定着药品的安全性、有效性及法规合规性。这不仅是技术挑战，更是守护患者生命健康的核心要求。本文将深入解析生物制药洁净室车间在控制这两类污染方面的关键要求。

一、尘粒污染控制的核心要求

尘粒不仅仅是肉眼可见的“灰尘”，尤其在生物制药洁净环境中，它们可能携带微生物、干扰精密设备、影响产品纯度。

空气洁净度分级（ISO 14644/GMP A/B/C/D区）：

严格的分级标准： 洁净室根据单位体积空气中允许的最大尘粒数量（按粒径，如 ≥0.5µm, ≥5.0µm）划分为不同等级（如 ISO 5级/A级、ISO 7级/B级、ISO 8级/C级）。

关键区域（A级）： 高风险操作点（如无菌灌装、敞口容器操作），要求最高的空气洁净度（ISO 5级）。通常通过单向流（层流） 装置（如RABS、隔离器）实现。

背景区域（B/C/D级）： 支持关键操作的低风险区域，洁净度要求依次降低，但仍远高于普通环境。

高效空气过滤（HEPA/ULPA）：

核心防线： 高效过滤器是去除空气中尘粒的关键。

HEPA（高效颗粒空气过滤器）： 对 ≥0.3µm 微粒过滤效率≥99.97%。

ULPA（超高效空气过滤器）： 对 ≥0.12µm 微粒过滤效率≥99.999%。常用于最严苛的A级区域。

完整性测试与定期更换： 必须定期进行过滤器完整性测试（如PAO/DOP测试）并按计划更换，确保过滤效能。

气流组织与压差控制：

定向气流： 设计合理的送风和回风系统，确保空气从洁净度高的区域流向洁净度低的区域（压差梯度），防止污染扩散。

关键压差维持： A级区对背景区（B级）必须维持显著正压（通常≥15Pa）。不同洁净级别区域之间也需要维持适当的正压或负压梯度（如某些有粉尘产生的区域需维持负压）。

持续的环境监测（EM）：

实时粒子计数： 使用在线或便携式粒子计数器，按法规要求和风险评估确定的频率与点位进行监测，确保洁净度持续达标（尤其是在动态操作期间）。

趋势分析与报警： 监测数据必须进行趋势分析，超标结果必须触发调查和纠正预防措施（CAPA）。

二、微生物污染控制的严苛要求

微生物（细菌、真菌、病毒、内毒素等）是生物制品（尤其是无菌产品）的主要风险，可能导致产品变质、失效甚至对患者造成严重感染。

空气微生物控制：

浮游菌监测： 使用主动式空气采样器（MAS）收集空气中的微生物，培养计数，评估空气的生物负荷。频率和点位需基于风险评估和区域关键性确定。

沉降菌监测： 使用沉降碟（被动监测）收集因重力沉降的微生物，评估表面潜在的微生物负荷。

表面微生物控制： HEPA/ULPA过滤是去除空气中微生物载体的物理屏障。

表面微生物控制：

严格的清洁与消毒程序（C&S）：

SOP制定： 详细规定清洁消毒的频率、方法、使用的消毒剂种类及浓度、作用时间、覆盖区域。

轮换使用： 至少使用两种（通常两种以上）作用机制不同的消毒剂轮换使用（如杀孢子剂、醇类、季铵盐类），防止微生物产生耐受性。

杀孢子验证： 定期验证使用的杀孢子程序的有效性。

清洁消毒效果确认（表面微生物监测）： 使用接触碟（RODAC）或表面擦拭法，定期对设备、墙面、地面、工作台面等进行微生物取样监测。

表面光洁与易清洁设计： 所有表面必须光滑、无孔、耐腐蚀、不脱落，便于彻底清洁和消毒。

人员行为规范：

严格的更衣程序（GDP）： 进入不同级别洁净区必须遵循规定的更衣程序，包括洗手、穿戴无菌洁净服（连体服、头套、口罩、手套、鞋套甚至第二层手套/鞋套）。A/B级区需执行严格的无菌更衣流程并通过资格确认（媒体灌装模拟）。

行为准则： 限制不必要的移动和交谈，避免快速动作产生湍流，减少进入洁净区的人数，所有操作需规范、轻柔。

定期培训与资质确认： 人员必须接受充分的微生物学、无菌操作、更衣程序和行为规范的培训，并通过考核确认资质。

物料与设备控制：

灭菌/除菌处理： 所有进入无菌核心区的物料、器具、设备必须经过确认有效的灭菌方法（如高压蒸汽灭菌SIP、干热灭菌、除菌过滤）或严格的表面消毒处理。

无菌传递： 物料进入洁净区需通过经确认的传递方式（如带UV的传递窗、双扉灭菌柜、RTP快速传递口等），防止污染引入。

设备设计： 设备应设计为易于清洁消毒（CIP/SIP），不产生污染源，材质兼容。

微生物监测计划与环境控制策略（CCS）：

基于风险的监测计划： 微生物取样点、频率、方法、警戒限/行动限的设定必须基于科学的风险评估（产品特性、工艺步骤、历史数据、设施设计）。

环境控制策略（CCS）： 这是一个综合性的、文件化的风险管理方法，旨在确保工艺性能和产品质量。它将包括设施与设备设计、清洁消毒策略、人员控制、公用系统（HVAC、水、气体）、环境监测数据、工艺监测、偏差与变更管理等多维度控制措施整合成一个有机的整体。CCS强调预防为主，通过理解工艺和风险，设计全面的控制措施并持续监控其有效性。